<855> 散射光濁度法和透射光比濁法 

1.     介紹

散射光濁度法和透射光比濁法是基于光散射現(xiàn)象原理的分析技術(shù)。光散射是一種物理現(xiàn)象，其中光束由于與足夠小的物質(zhì)粒子相互作用而改變其傳播方向（稱為偏轉(zhuǎn)）。根據(jù)麥克斯韋電磁理論，散射發(fā)生的先決條件是懸浮顆粒的折射率必須不同于懸浮液體的折射率。差異越大，散射越強(qiáng)烈。光散射有兩種類型：1）彈性散射，其中散射光和入射光的波長(zhǎng)相同；2）非彈性光散射，其中散射光和入射光的波長(zhǎng)不同。只有第一種光散射（彈性）與散射光濁度法和透射光比濁法有關(guān)。

在透射光比濁法中，測(cè)量透射光的強(qiáng)度，并在入射光方向（即0°）測(cè)量散射導(dǎo)致的入射光強(qiáng)度的衰減，并與入射光強(qiáng)度進(jìn)行比較（空白測(cè)量）。被測(cè)特性是懸浮顆粒散射效應(yīng)的間接測(cè)量，稱為濁度。懸浮樣品對(duì)光的任何吸收都會(huì)導(dǎo)致光強(qiáng)度的額外衰減（參見<857> Ultraviolet-Visible Spectroscopy和<1857> Ultraviolet-Visible Spectroscopy—Theory and Practice）。因此，確保被測(cè)材料不會(huì)吸收測(cè)量波長(zhǎng)處的光非常重要。實(shí)際上，控制吸收和濁度測(cè)定的方程式是相同的（盡管衰減常數(shù)的值不同）。在散射光濁度法中，測(cè)量與入射光傳播方向成90°角的散射光強(qiáng)度。因此，散射光濁度法濁度測(cè)量是對(duì)懸浮物散射效應(yīng)的直接測(cè)量。

2. 術(shù)語(yǔ)和定義

描述濁度法和濁度法的常用術(shù)語(yǔ)包括：

•濁度（符號(hào)S）：由于懸浮顆粒的光散射效應(yīng)，透射入射光束強(qiáng)度降低的一種度量。懸浮物的量可以通過觀察透射光（比濁法）或散射光（濁度法）來測(cè)量。

log I₀/I_t = kbc = T

I₀=入射光強(qiáng)度

I_t=透射光強(qiáng)度

k=摩爾濁度系數(shù)

b=樣品池路徑長(zhǎng)度

c=濃度

T=濁度

•濁度（符號(hào)，τ）：在透射光濁度測(cè)量中，濁度是給定懸浮液的入射光束強(qiáng)度/單位長(zhǎng)度減少的量度。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織將濁度定義為“由于存在未溶解物質(zhì)而導(dǎo)致液體透明度降低”。

•濁度測(cè)量單位：渾濁度單位用一個(gè)描述符表示，該描述符指示測(cè)量方法。

•散射光濁度計(jì)濁度單位（NTU）：當(dāng)使用散射光濁度法測(cè)量濁度時(shí)，濁度計(jì)以與入射光傳播方向成90°角的角度測(cè)量散射光，濁度單位稱為散射光濁度法濁度單位（NTU）。NTU的大小是根據(jù)初級(jí)福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)品（一種將硫酸肼和六亞甲基四胺溶液混合在水中制成的懸浮液）產(chǎn)生的濁度定義的。更安全的聚合物微珠懸浮液現(xiàn)已上市，并被*為可接受的替代品。然而，所有這些標(biāo)準(zhǔn)都可以追溯到福爾馬肼。初級(jí)福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液的濁度為4000 NTU。

其他*的濁度單位包括福爾馬肼比濁法單位（FTU）和福爾馬肼濁度法單位（FNU）。這些單位相當(dāng)于0-40 NTU范圍內(nèi)的NTU。

3.     應(yīng)用

透射光比濁法和散射光濁度法技術(shù)的應(yīng)用包括1）溶液和/或懸浮液的濃度測(cè)定（通過在控制良好的反應(yīng)參數(shù)下沉淀和懸浮產(chǎn)生的沉淀物，來測(cè)定幾種陽(yáng)離子和陰離子）；2）測(cè)量混濁溶液或懸浮液的濁度；3）測(cè)定分子量在1000到數(shù)億之間的多分散體系的重均分子量和尺寸；4）測(cè)量免疫分析的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)或免疫沉淀動(dòng)力學(xué)（比率散射濁度法）；5）監(jiān)測(cè)細(xì)胞和細(xì)菌的生長(zhǎng)；6）懸浮物粒度分布測(cè)定、顆粒計(jì)數(shù)等。

比率散射濁度法廣泛用于疫苗成分分析和/或血清成分的定量。它還用于重組生物制藥中的宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)鑒定。當(dāng)使用該技術(shù)時(shí)，通過測(cè)量抗原-抗血清或抗原純化抗體復(fù)合物的光散射反應(yīng)的變化，來計(jì)算導(dǎo)致免疫抗體-抗原沉淀反應(yīng)或凝集反應(yīng)的抗原（Ag）或抗體（Ab）的量。通?？紤]抗原共價(jià)連接或吸附在聚合物微球上，以提高散射效率；由此產(chǎn)生的技術(shù)被稱為“顆粒增強(qiáng)免疫分析”。雖然這項(xiàng)技術(shù)被稱為散射光濁度法，但通常散射光和透射光都是用比率儀器測(cè)量的。

散射光法濁度測(cè)量在低濁度范圍（散射介質(zhì)濃度相對(duì)較低）更可靠。在該范圍內(nèi)，觀察到樣品濃度與檢測(cè)器信號(hào)強(qiáng)度（以NTU表示）之間存在線性關(guān)系。隨著濃度的增加，多次散射的入射角也會(huì)增加，從而偏離線性響應(yīng)。支持可靠線性關(guān)系的最大NTU值在1750–2000 NTU范圍內(nèi)。透射光比濁法適用于更高的濁度范圍（散射介質(zhì)的濃度）。為了獲得一致的結(jié)果，必須仔細(xì)控制所有測(cè)量變量。在可能的情況下，可以測(cè)量極稀的懸浮液。

4. 儀器儀表

用于透射光比濁法和散射光濁度法測(cè)量的儀器分別稱為透射光濁度計(jì)和散射光濁度計(jì)。通常，這些儀器包括一個(gè)帶有濾光器的汞燈（用于強(qiáng)綠線或藍(lán)線）、一個(gè)快門、一組具有已知透射率的中性濾光器和一個(gè)靈敏的光電倍增管，該光電倍增管可安裝在與入射光傳播方向成0°或90°角的位置，或者在一個(gè)臂上，它可以圍繞溶液?jiǎn)卧D(zhuǎn)，并通過不透光外殼外的表盤設(shè)置為−135°到0°到+135°的任何角度。溶液池的形狀多種多樣，例如用于測(cè)量90°散射的正方形；45°、90°和135°散射為半八角形；圓柱形可適用于所有角度的散射（見圖1）。

圖1.代表性濁度儀。注意，探測(cè)器2可安裝在可移動(dòng)臂上。

濁度也可以用標(biāo)準(zhǔn)光電濾光光度計(jì)或分光光度計(jì)測(cè)量，最好是在光譜的藍(lán)色部分進(jìn)行照明。散射光濁度法測(cè)量需要一個(gè)裝有光電管的儀器，以便接收散射光，而不是透射光。由于這與熒光計(jì)中使用的幾何結(jié)構(gòu)相同，因此可通過適當(dāng)選擇濾光片將其用作濁度計(jì)。比率濁度計(jì)結(jié)合了90°散射光濁度法和透射光比濁法。它包含光電管，接收和測(cè)量與樣品成90°角的散射光，以及接收和測(cè)量樣品前面的前向散射光。它還測(cè)量直接穿過樣品的光。通過90°角散射光測(cè)量值，前向散射光測(cè)量值和透射光測(cè)量值之和，計(jì)算兩者的比值，可獲得線性度。使用比率濁度測(cè)量系統(tǒng)的好處是雜散光的測(cè)量變得可以忽略不計(jì)。此外，彩色懸浮液的濁度測(cè)定僅使用透射光比濁法濁度儀或濁度儀（帶比率模式）進(jìn)行，因?yàn)樵摮绦蜓a(bǔ)償了懸浮液顏色導(dǎo)致的光衰減。通常，這些儀器中的光源是鎢燈，在2700 K的燈絲溫度下工作，大部分光強(qiáng)約為550 nm。也可使用其他合適的光源。通常，探測(cè)器是▲硅二極管▲和光電倍增管。另一種消除顏色效應(yīng)的方法是使用紅外發(fā)光二極管作為光源，其最大發(fā)射中心約為860 nm，光譜帶寬為60 nm。當(dāng)激光光源也被使用時(shí)，尤其是在濁度測(cè)量?jī)x器中，這種技術(shù)通常被稱為“激光濁度測(cè)量”。使用激光散射光濁度計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是，在非常低的檢測(cè)水平下，信噪比顯著提高。通常光源是工作波長(zhǎng)為660 nm的激光二極管。激光束的高功率密度使較小粒子產(chǎn)生更高的散射強(qiáng)度。與吸收未散射光的光阱相結(jié)合，該系統(tǒng)可顯著降低雜散光。當(dāng)專著中的某個(gè)程序指示使用散射光濁度計(jì)或透射光濁度計(jì)時(shí)，可以使用在比率模式下工作的儀器。

5. 福爾馬肼濁度標(biāo)準(zhǔn)

福爾馬肼是目前已知的主要濁度標(biāo)準(zhǔn)。所有其他標(biāo)準(zhǔn)都是次要的，必須追溯到福爾馬肼。 主要標(biāo)準(zhǔn)在▲IUPAC Compendium of Chemical Terminology▲（ERR 1-May-2019）第 2 版（金書）中被定義為由用戶使用明確定義的方法和條件從可追溯的材料準(zhǔn)備的標(biāo)準(zhǔn)。

福爾馬肼懸浮液有許多特點(diǎn)，以確保其適合作為主要標(biāo)準(zhǔn)。它可以從試劑級(jí)的起始材料中始終如一、準(zhǔn)確地制備。該懸浮液由不同長(zhǎng)度和隨機(jī)構(gòu)型的聚合物組成，其組成的聚合物的形狀和尺寸從小于0.1 μm到大于10 μm不等。盡管聚合物鏈長(zhǎng)分布已被證明因制備而異，但總的濁度結(jié)果是可以很好地重現(xiàn)的。

5.1 Preparation of the Formazin Standards 福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)液的制備

•硫酸肼溶液：將1.000 g ACS級(jí)硫酸肼（N₂H₄·H₂SO₄）溶解在100 mL 的A類容量瓶中中，并用無顆粒水稀釋至刻度。讓該溶液靜置4-6小時(shí)。

•初級(jí)福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)液：將2.50 g分析級(jí)六亞甲基四胺[(CH₂)₆N₄]溶于25.0 mL無顆粒水中，裝入100 mL燒瓶。使用A類25 mL移液管加入25.0 mL硫酸肼溶液，并充分混合。使用前，讓制劑在25±1°的溫度下靜置48小時(shí)。由此產(chǎn)生的懸浮液可穩(wěn)定運(yùn)行2個(gè)月。

•福爾馬肼儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)懸浮液1：使用15 mL A類移液管，將15 mL福爾馬肼初級(jí)標(biāo)準(zhǔn)液轉(zhuǎn)移至1 L容量瓶中，并用無顆粒水稀釋至刻度并混合。所得懸浮液的濁度為60 NTU。

•福爾馬肼儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)懸浮液2：使用50 mL A類移液管，將50 mL福爾馬肼初級(jí)標(biāo)準(zhǔn)液轉(zhuǎn)移至200 mL容量瓶中，并用無顆粒水稀釋至刻度并混合。所得懸浮液的濁度為1000 NTU。

•福爾馬肼參考懸浮液：根據(jù)表1，在100 mL容量瓶中混合各份福爾馬肼儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)懸浮液和無顆粒水，制備福爾馬肼參考懸浮液。

6.     透射光式濁度儀與散射光式濁度儀的鑒定

特定儀器對(duì)給定程序的適用性由從選擇到儀器報(bào)廢的預(yù)期應(yīng)用的逐步生命周期評(píng)估來確保。鑒定包括三個(gè)部分：1）安裝鑒定（IQ）、2）操作鑒定（OQ）和3）性能鑒定（PQ）（參見<1058>Analytical Instrument Qualification章節(jié)）。

本節(jié)的目的是提供測(cè)試方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，以確保儀器適合其預(yù)期用途（OQ），并在延長(zhǎng)的時(shí)間段（PQ）內(nèi)繼續(xù)正常工作。與任何光譜儀一樣，透射光式和散射光式濁度光譜儀必須具備波長(zhǎng)（x軸）和光度（y軸或信號(hào)軸）的準(zhǔn)確度及精度，并滿足雜散光的要求。OQ是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吸光度和波長(zhǎng)標(biāo)度所需的操作范圍內(nèi)進(jìn)行的。

在IQ和OQ期間，驗(yàn)證確定“用途適用性”的關(guān)鍵儀器參數(shù)的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。特定儀器和應(yīng)用的規(guī)格可能因使用的分析程序和最終結(jié)果的預(yù)期準(zhǔn)確度而異。儀器供應(yīng)商通常將樣品和測(cè)試參數(shù)作為IQ/OQ包的一部分提供。

在以下詳述的程序中，應(yīng)盡可能使用主要參考標(biāo)準(zhǔn)或認(rèn)證參考材料（CRM）。福爾馬肼是比濁法和濁度法中目前使用的主要參考標(biāo)準(zhǔn)。所有其他標(biāo)準(zhǔn)，包括CRM，必須與福爾馬肼相關(guān)。CRM應(yīng)從認(rèn)可的認(rèn)證來源獲得，并包括獨(dú)立驗(yàn)證的可追溯值分配及相關(guān)的計(jì)算不確定性。CRM必須保持清潔，無灰塵。應(yīng)定期進(jìn)行重新認(rèn)證，以保持認(rèn)證的有效性。

6.1校準(zhǔn)

所有透射光式濁度儀和散射光式濁度儀均根據(jù)已知濁度的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行校準(zhǔn)。在初次使用之前，必須使用福爾馬肼濁度標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，至少每3個(gè)月或按照供應(yīng)商的規(guī)定進(jìn)行一次校準(zhǔn)。使用至少四種福爾馬肼濁度標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)，其濁度按比例覆蓋感興趣的范圍。許多儀器制造商提供校準(zhǔn)驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。它們通常由其中充滿聚合物凝膠中的金屬氧化物顆粒的密封樣品池或乳膠懸浮液組成。這些標(biāo)準(zhǔn)只能用于檢查儀器推薦校準(zhǔn)的時(shí)間間隔內(nèi)的校準(zhǔn)。

6.2 Stray Light雜散光

雜散光(雜散光輻射能)是一個(gè)非常重要的誤差源，特別是在較低的濁度讀數(shù)范圍內(nèi)的測(cè)量。它被定義為到達(dá)探測(cè)器而不被樣品散射的外部光線。雜散光有幾種來源，包括電池表面固有缺陷、電池內(nèi)部未被解釋的反射、光學(xué)系統(tǒng)部件、光源，以及在較小程度上的電子波動(dòng)。盡管儀器供應(yīng)商使用了許多設(shè)計(jì)功能來最小化雜散光，但無法*緩解雜散光。與分光光度測(cè)量不同，濁度法無法補(bǔ)償雜散光。必須測(cè)量雜散光，其值應(yīng)在特定儀器供應(yīng)商設(shè)定的規(guī)格范圍內(nèi)，或在0-10 NTU范圍內(nèi)測(cè)量時(shí)小于0.15 NTU，在10-1100 NTU范圍內(nèi)測(cè)量時(shí)小于0.5 NTU，以較小者為準(zhǔn)。

6.3測(cè)量能力的范圍

儀器必須能夠測(cè)量0.01–1100 NTU范圍內(nèi)或目標(biāo)濁度50%-200%范圍內(nèi)的濁度。為了證明預(yù)期測(cè)量范圍的線性，從表1中選擇至少四種合適的參考懸浮液。

6.4解決方案

對(duì)于0-9.99 NTU的測(cè)量范圍，儀器分辨率必須小于等于0.01 NTU；測(cè)量范圍為10-99.9 NTU時(shí)，小于等于0.1 NTU；100 NTU以上的測(cè)量分辨率值為1 NTU。

6.5準(zhǔn)確度

對(duì)于0-19.9 NTU的測(cè)量范圍，儀器讀數(shù)準(zhǔn)確度必須為讀數(shù)+0.01 NTU的±10%，對(duì)于20-1100 NTU的測(cè)量范圍，儀器讀數(shù)準(zhǔn)確度必須為讀數(shù)的±7.5%。

6.6性能鑒定

定期或根據(jù)需要在校準(zhǔn)期之間完成儀器PQ?？墒褂脙x器制造商提供的一級(jí)濁度標(biāo)準(zhǔn)（福爾馬肼）或二級(jí)校準(zhǔn)驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)（乳膠懸浮液或密封樣品池中聚合物凝膠中的金屬氧化物顆粒）。

7. 步驟

7.1透射光比濁法測(cè)試步驟

樣品池準(zhǔn)備

用于樣品測(cè)量的樣品室必須清潔。按照樣品池或儀器制造商的建議適當(dāng)清潔樣品池。對(duì)于低濁度測(cè)量，最好使用一個(gè)單指數(shù)樣品池或流動(dòng)池，這有助于確保測(cè)量的足夠精度和可重復(fù)性。使用無顆粒水，在樣品池支架中找到讀數(shù)較低的樣品池方向。對(duì)于較高的濁度值，可使用不同的樣品池。然而，樣品池必須匹配（兩個(gè)不同樣品池在標(biāo)稱樣品濃度下制備的標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)差異必須在±0.005 NTU范圍內(nèi)或低于測(cè)量精度要求，以較低者為準(zhǔn)）。

樣品準(zhǔn)備

按照各專題中的規(guī)定制備樣品。通過緩慢旋轉(zhuǎn)或倒置容量瓶數(shù)次，仔細(xì)混合樣品。避免搖晃或攪拌，因?yàn)檫@可能會(huì)產(chǎn)生氣泡。對(duì)樣品進(jìn)行脫氣有助于改進(jìn)測(cè)量。對(duì)于脫氣，樣品可以靜置幾分鐘，或者可以施加真空，或者可以使用超聲波浴對(duì)其進(jìn)行輕輕的超聲波處理。脫氣后，讓樣品靜置幾分鐘，然后小心地反轉(zhuǎn)兩到三次，再次混合。將樣品轉(zhuǎn)移至樣品池并讀取讀數(shù)。

流動(dòng)池的使用

流動(dòng)池主要用于小顆粒樣品的低濁度測(cè)量。當(dāng)使用這種樣品池時(shí)，通過小心地將樣品倒入進(jìn)水倉(cāng)的內(nèi)邊緣來引入樣品。

在實(shí)際過程中，建議確保被測(cè)顆粒的沉降可以忽略不計(jì)。這通常通過在液體懸浮介質(zhì)中加入保護(hù)膠體來實(shí)現(xiàn)。重要的是，通過將讀數(shù)與在*相同的條件下產(chǎn)生的已知懸浮物濃度的讀數(shù)進(jìn)行比較來解釋結(jié)果。

7.2散射光濁度法步驟

散射光濁度法步驟的執(zhí)行方式與透射光比濁法程序類似，適用于直接測(cè)量和上述比率模式下的測(cè)量。

比率模式散射光濁度法步驟

監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程的總體程序包括三個(gè)明確定義的步驟：1）記錄介質(zhì)濁度的基線讀數(shù)（空白）；2）在添加第一種試劑（抗原）后，記錄濁度，這會(huì)導(dǎo)致濁度增加，直到達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定期；3）添加第二種試劑（抗體），這會(huì)導(dǎo)致另一個(gè)濁度增加和第二個(gè)穩(wěn)定期，然后是最終濁度增加，直到達(dá)到第三個(gè)穩(wěn)定器。根據(jù)分析目的和各自的組分濃度，從添加抗體到第三個(gè)穩(wěn)定期中間選擇測(cè)量區(qū)。動(dòng)力學(xué)散射比濁法和終點(diǎn)散射比濁法是兩種通用程序，用于量化免疫分析方法中形成的免疫復(fù)合物（也稱為免疫散射比濁法，因?yàn)闇y(cè)得的濁度是由形成的免疫復(fù)合物引起的）。對(duì)于每一個(gè)步驟，都有幾個(gè)參數(shù)需要在每個(gè)單獨(dú)的應(yīng)用中進(jìn)行優(yōu)化。主要參數(shù)為1）有無粒子增強(qiáng)；2）顆粒類型、尺寸和各自的最佳波長(zhǎng)（如適用）；3）監(jiān)測(cè)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)或終點(diǎn)；4）考慮中的抗體/抗原，以及與之相關(guān)的抗原負(fù)載的最佳水平；5） 緩沖液和其他離子種類以及各自的最佳pH值；6）用于改變蛋白質(zhì)溶解度的聚合物的類型和濃度；7）溫度和其他環(huán)境因素。通常，這些參數(shù)在方法開發(fā)過程中進(jìn)行了優(yōu)化，具體的專著和/或章節(jié)（如適用）中給出了這些值。

動(dòng)力學(xué)散射比濁法：與終點(diǎn)散射比濁法相比，動(dòng)力學(xué)散射比濁法具有優(yōu)勢(shì)，主要是因?yàn)槌嗽噭┛瞻鬃x數(shù)外，還能夠讀取樣品空白讀數(shù)。該程序基于所選波長(zhǎng)的散射光的增強(qiáng)強(qiáng)度響應(yīng)來評(píng)估免疫復(fù)合物的形成速率。根據(jù)所用儀器的時(shí)間響應(yīng)和應(yīng)用類型，可連續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，或采集一定數(shù)量的數(shù)據(jù)點(diǎn)。有時(shí)它可能只涉及兩個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)；但是在樣品和校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)之間存在反應(yīng)動(dòng)力學(xué)差異的情況下，選擇點(diǎn)可能會(huì)影響整體準(zhǔn)確度。應(yīng)仔細(xì)考慮特異性控制策略的適當(dāng)選擇。

終點(diǎn)散射比濁法：在該方法中，在添加試劑之前進(jìn)行初始測(cè)量，這代表空白讀數(shù)。大約60分鐘后，在免疫復(fù)合物形成后進(jìn)行第二次測(cè)量。這兩次測(cè)量之間的差異與所分析成分的含量成正比。

8. 驗(yàn)證與核查

8.1 驗(yàn)證

當(dāng)散射比濁法/透射濁度法擬用作物品測(cè)試程序的替代方法時(shí)，需要進(jìn)行驗(yàn)證。當(dāng)散射比濁法/透射濁度法驗(yàn)證的目的是證明測(cè)量適用于其預(yù)期目的，包括原料藥或藥品中主要成分的定量測(cè)定（I類分析）、雜質(zhì)的定量測(cè)定或限度試驗(yàn)（II類）以及鑒定試驗(yàn)（IV類）。根據(jù)試驗(yàn)的類別（參見<1225>Validation of Compendial Procedures，表2），透射濁度法/散射比濁法的分析方法驗(yàn)證過程需要對(duì)準(zhǔn)確度、精密度、特異性、檢測(cè)限（DL）、定量限（QL）、線性、范圍和穩(wěn)健性進(jìn)行試驗(yàn)。這些分析性能特征適用于外部標(biāo)準(zhǔn)化程序和那些使用標(biāo)準(zhǔn)添加的程序。

<1225>Validation of Compendial Procedures章節(jié)提供了分析程序驗(yàn)證的定義和一般指南，但沒有說明每個(gè)特征的具體驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。以下各節(jié)的目的是向用戶提供具體的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，這些標(biāo)準(zhǔn)代表了對(duì)該技術(shù)的較低期望。對(duì)于每個(gè)特定應(yīng)用，可能需要更嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)，以證明其適用于預(yù)期用途。

準(zhǔn)確度

對(duì)于I類、II類和III類程序，可通過使用加入已知分析物濃度的適當(dāng)基質(zhì)進(jìn)行回收研究來確定準(zhǔn)確度。分析員還可以將使用驗(yàn)證中的散射光濁度法/透射光比濁法程序獲得的分析結(jié)果與已建立的分析程序獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。

驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：原料藥的平均回收率為98.0%–102.0%，藥品分析的平均回收率為95.0%–105.0%，雜質(zhì)分析的平均回收率為80.0%–120.0%。這些標(biāo)準(zhǔn)在整個(gè)規(guī)定范圍內(nèi)都得到滿足。

精度

重復(fù)性：通過測(cè)量六種獨(dú)立制備的樣品溶液在分析試驗(yàn)濃度下的濃度來評(píng)估分析程序的重復(fù)性。或者，可以通過測(cè)量三種不同濃度的單獨(dú)樣品溶液的三個(gè)重復(fù)的濃度來評(píng)估。三種濃度應(yīng)足夠接近，以便在整個(gè)濃度范圍內(nèi)重復(fù)性保持恒定。如果這樣做，將三種濃度下的重復(fù)性匯總，以與驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。

驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：原料藥的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為NMT 1.0%，藥品分析的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為NMT 2.0%，雜質(zhì)分析的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為NMT 20.0%。

中間精度：必須確定隨機(jī)事件對(duì)方法分析精度的影響。典型的變量包括在不同的日期使用不同的儀器進(jìn)行分析，和/或由兩名或兩名以上的分析員進(jìn)行分析。至少，這些因素中的至少兩個(gè)的組合，總共6個(gè)實(shí)驗(yàn)，將提供中等精度的評(píng)估。

驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：原料藥的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為NMT 1.5%，藥品分析的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為NMT 3.0%，雜質(zhì)分析的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為NMT 25.0%。

特異性

在散射光濁度法/透射光比濁法的濁度測(cè)量中，特異性通過基質(zhì)中其他成分的干擾（基質(zhì)的其他成分產(chǎn)生真實(shí)溶液）的缺乏來證明。

檢測(cè)限

可以通過計(jì)算溶液的濃度來估計(jì)檢測(cè)限DL，該濃度將給出信號(hào)的信噪比≥3.3. 必須通過分析計(jì)算濃度下的樣品來確認(rèn)估計(jì)的DL。

定量限

定量限QL可以通過計(jì)算溶液的濃度來估算，該濃度將給出信號(hào)的信噪比≥10.0. 必須通過分析計(jì)算濃度下的樣品來確認(rèn)估算的QL。必須對(duì)以所需QL濃度添加的代表性樣品基質(zhì)制備的試液進(jìn)行測(cè)量，以確認(rèn)其具有足夠的靈敏度和精度。在所需QL下觀察到的信噪比應(yīng)大于10。

驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn):估計(jì)的定量限被認(rèn)為是有效的，測(cè)量的濃度必須是準(zhǔn)確的，并且在≤50%的規(guī)格水平上是精確的。

線性

分析物濃度和測(cè)得的濁度響應(yīng)之間的線性關(guān)系必須通過制備至少四種標(biāo)準(zhǔn)溶液來證明，其濃度包括試驗(yàn)溶液的預(yù)期濃度。然后使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法（如最小二乘回歸）評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過降低或增加分析物濃度，可將儀器或樣品因素或兩者的線性偏差降低至可接受水平，從而分別將濁度讀數(shù)降低或增加至透射光法濁度計(jì)/散射光濁度計(jì)儀器線性范圍內(nèi)。

驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)于I類分析，相關(guān)系數(shù)（R）必須為NLT 0.995，對(duì)于II類定量測(cè)試，相關(guān)系數(shù)（R）必須為NLT 0.99。

范圍

分析儀器（以及整個(gè)分析程序）的操作范圍是樣品中分析物的上下濃度（數(shù)量）（包括這些濃度）之間的間隔，已證明儀器響應(yīng)函數(shù)具有適當(dāng)?shù)木取?zhǔn)確度和線性水平。

驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)于I類試驗(yàn)，100.0%中心驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證范圍為80.0%–120.0%。對(duì)于非中心驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證范圍為下限以下10.0%到上限以上10.0%。對(duì)于II類試驗(yàn)，驗(yàn)證范圍涵蓋驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)的50.0%–120.0%。

穩(wěn)健性

分析測(cè)量的可靠性通過有意改變實(shí)驗(yàn)參數(shù)來證明。 對(duì)于散射光濁度法/透射光比濁法，這可以包括：測(cè)量分析物在特定儲(chǔ)存條件、變化的 pH 值和添加可能的干擾物質(zhì)下的穩(wěn)定性。使用適合實(shí)驗(yàn)程序的設(shè)計(jì)，同時(shí)確保穩(wěn)健性。

8.2核查

現(xiàn)行的《美國(guó)生產(chǎn)規(guī)范條例》[21 CFR 211.194（a）（2）]表明，如果專論中提供了這些程序，則美國(guó)藥典和國(guó)家處方集中描述的分析程序的用戶無需驗(yàn)證這些程序。相反，他們只需驗(yàn)證其在實(shí)際使用條件下的適用性。

散射光濁度法/透射光比濁法程序驗(yàn)證的目的是證明測(cè)試程序在實(shí)際使用條件下的適用性。驗(yàn)證散射光濁度法/透射光比濁法程序適用性的性能特征與任何分析程序所需的性能特征相似。適用的一般原則的討論見<1226>Verification of Compendial Procedure 章節(jié)。通常使用參考材料和明確定義的基質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。 藥典散射光濁度法/透射光比濁法程序的驗(yàn)證至少包括對(duì)特異性、準(zhǔn)確度、精密度和 QL 的驗(yàn)證參數(shù)的執(zhí)行（如 8.1 驗(yàn)證中所述）。

解決方案：

上海胤煌科技針對(duì)藥劑的澄清度檢查-儀器法推出了以下產(chǎn)品：

YH-CLS-1201澄清度檢查分析儀

此儀器采用全彩液晶觸摸屏進(jìn)行操作控制，可以直接檢測(cè)注射用原料藥和注射劑的澄清度，并具備四級(jí)權(quán)限管理和審計(jì)追蹤功能，*GMP的數(shù)據(jù)完整性要求，是進(jìn)行液體一致性評(píng)價(jià)的有效儀器。